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草酸鉀兔血漿培養(yǎng)基的配制

發(fā)表時(shí)間:2020-12-24 11:54

草酸鉀兔血漿培養(yǎng)基的配制:

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1)、Camp-BAP固體培養(yǎng)基的配制:

稱取8.92g培養(yǎng)基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入200ul添加劑A、200ul添加劑B和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。(添加劑A和B為購(gòu)買附帶)。

2)、Skirrow固體培養(yǎng)基的配制:

稱取8.5g培養(yǎng)基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。

FBP原液配置:

分別稱取0.5g焦亞硫酸鈉、0.5g丙酮酸鈉和0.5g硫酸亞鐵,溶于20ml蒸餾水中,濾膜過(guò)濾除菌,放置4°C冰箱可保存一周。

3)、布氏肉湯增菌液的配制:

稱取28.1g布氏肉湯粉末,溶解于1000ml蒸餾水中高壓滅菌,冷卻后備用。


2、增菌培養(yǎng)

寬鱗大孔菌將新鮮食品,如雞肉,減碎,取5g置于50ml離心管中,加入布氏肉湯至液面覆蓋雞肉樣品,擰緊離心管,先在37°C下預(yù)增菌4小時(shí),在加入100 ul頭孢哌酮(30mg/ml),并顛倒混勻,放置在微需氧培養(yǎng)箱中42°C培養(yǎng)48小時(shí)。


3、分離純化


用接種環(huán)沾取增菌液劃線于Skirrow血平板上,在平板上挑取不溶血、灰色、有光澤、且邊緣整齊發(fā)亮的菌落在Camp-BAP平板上純化,挑取扁平、灰色、像水滴樣菌落多次純化后保存。


4、菌株培養(yǎng)


將純化的彎曲桿菌單菌落接種到Skirrow血平板上,放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時(shí),觀察細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)。微需氧條件的創(chuàng)造可用微需氧產(chǎn)氣袋和密閉培養(yǎng)罐,也可以用微需氧培養(yǎng)箱(三氣培養(yǎng)箱)培養(yǎng)。


5、菌株保存方法


挑取單克隆菌株在Skirrow固體培養(yǎng)基上平板劃線,放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時(shí),用滅菌棉簽從平板上刮下長(zhǎng)出的菌落,懸浮在50%甘油的布氏肉湯保種液中,置于-80°C超低溫保存。在-20°C冰箱中保存效果較差,存放一周后細(xì)菌復(fù)蘇率即顯著下降。此外,保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。


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